JaICA高靈敏度8-OHdG Check ELISA試劑盒適用樣品包括組織，細胞培養，血清/血漿，尿液，本文介紹8-OHdG檢測前的組織/細胞培養樣品預處理程序（點擊這里查看8-OHdG檢測血清/血漿樣品預處理程序）。

這是檢測組織樣品或培養細胞中的8-OHdG的應用示例。實驗條件應由每個用戶確定。

1. 從細胞中提取DNA

使用DNA提取試劑盒從勻漿中提取DNA。請遵照產品說明書操作。

以下是適用于8-OHdG檢測的DNA提取試劑盒，可從WAKO Chemicals USA Inc.和WAKO Chemicals GmbH（德國）獲得。

1）DNA提取? WB試劑盒（碘化鈉的方法）：目錄號291-50502

2）DNA提取? TIS試劑盒（碘化鈉的方法）：目錄號296-67701

3）的8-OHdG檢測制劑試劑組：目錄號292- 67801

2. DNA濃度和純度的計算

   a） 用TE緩沖液將DNA溶液稀釋至20-50 μg / mL。

   b） 在230nm，260nm，280nm和320nm波長處測量吸光度。

   C） 計算DNA濃度。（260nm處的吸光度1.0等于50 μg / mL DNA）

DNA濃度（μg / mL）=（260nm處的吸光度）*（50 μg / mL）*稀釋率

   d） 檢查DNA樣品的純度。

（260nm處的吸光度）：（280nm處的吸光度）之比通常在1.8至1.85之間。

分離的DNA的純度通過（在260nm處的吸光度）與（在230nm處的吸光度）之比評估，并且應在2.2至2.25之間。

3. DNA的酶消化

   a） 將200 μg提取的DNA溶解在135 μL的水中。

   b） 向DNA溶液中加入15微升200mM乙酸鈉和6單位核酸酶P1（15 μL，1 mg / mL），然后在氬氣置換后于37°C孵育30分鐘至1小時。

   C） 加入1M Tris-HCl緩沖液（15 μL，pH 7.4）和2單位堿性磷酸酶（7 μL，200單位/0.7mL），在氬氣置換后于37°C孵育30分鐘至1小時。

   d） 為了除去酶和其他大分子，將水解產物通過Millipore Microcon YM-10（catalog＃42407）在14000rpm下過濾10分鐘。

   e） 將50 μL DNA消化液加到ELISA試劑盒的孔中。建議應在一天之內完成此處提到的分析程序。

 注意：

1）經酶處理的樣品應在同一天使用。

2）TE緩沖液：1mM EDTA / 10mM Tris-HCl，pH8.0

3）所用的水應通過Chelex（Bio Rad）處理以去除痕量金屬離子。

參考文獻

1） ML Hamilton，Z Guo，CD Fuller，H Van Remmen，WF Ward，SN Austad，DA Troyer，I Thompson，A Richardson：

使用碘化鈉方法可靠地評估核和線粒體DNA中的8-oxo-2-deoxyguanosine水平分離DNA。

核酸研究。Vol.29（10），p2117-2126，2001

2） S豐國等。等：

單克隆抗體N45.1定量免疫組織化學測定8-羥基-2'-脫氧鳥苷：在次氮基三乙酸鐵誘導的腎癌模型中的應用。

實驗室調查，第一卷。76，No.3，p365-374，1997年

3） M Kakimoto，T Inoguchi，T Sonta，HY Yu，M Imamura，T Etoh，T Hashimoto和H Nawata：

糖尿病大鼠腎臟中8-羥基-2'-脫氧鳥苷的積累和線粒體DNA缺失。

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4） D Nakae，Y Mizumoto，E Kobayashi，O Noguchi和Y Konishi：

改進的基因組/核DNA提取技術可用于少量大鼠肝組織的8-羥基脫氧鳥苷分析。

癌癥通訊。97，p233-239，1995